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反相液相色譜柱使用注意事項

更新時間:2022-08-16點擊次數:1964
反相液相色譜柱過程中注意事項
1、新c18反相液相色譜柱在使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展*,使色譜柱的性能達到狀態(tài)。具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,把色譜柱進口端連接在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測器,以免污染了檢測器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,過20分鐘后再接上檢測器,以1.0ml/min的流速,繼續(xù)沖洗2~8小時;
2、反相液相色譜柱檢測分析樣品完畢后,須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時,需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積;
3、若c18反相液相色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時,要將色譜柱*沖洗,建議沖洗3-4小時以上,zui后保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液(如90%甲醇水)中;
4、由于反相液相色譜柱的固定相疏水性較強,在使用過程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負面影響;由于碳載量高,表現尤為明顯,建議使用過程中水相比例不超過90%;
5、c18反相液相色譜柱壓力升高、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效;  
6、反相液相色譜柱壓力驟升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,若是鹽析出,用10%甲醇水低流速沖洗至壓力恢復即可;若判斷并非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測器),若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效,需尋找其他原因。


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